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真菌的形態觀察與革蘭氏染色

實驗、真菌的形態觀察與革蘭氏染色

一、目的

1、學習并掌握酵母菌和霉菌形態結構的觀察方法;

2、加深理解酵母菌和霉的形態特

征。

3、鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。

二、試劑與器材

1.材料菌種:啤酒酵母、霉菌裝片

2. 儀器及相關用品:顯微鏡,香柏油,二甲苯(或1﹕1的乙醚酒精溶液),擦鏡紙、

呂氏堿性美藍染液(或草酸銨結晶紫染液)、齊氏石炭酸復紅染液。

3、G+和G-菌種

三、內容

1、酵母菌形態和無性孢子的觀察

2、霉菌形態和無性孢子的觀察,由菌絲(hypha)和孢子(spore)組成,菌絲與孢子交織在一起。各種霉菌的菌絲和孢子形態不同,是鑒別真菌的重要標志。

3、革蘭氏染色簡單染色法:涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢

步驟

(1)涂片:取一潔凈載玻片,滴一小滴生理鹽水于玻片中央,按無菌操作要求,先用接種環,挑取少量某菌培養物于玻片中央水滴中,涂布均勻。要求涂片薄而均勻。

使其自然干燥。

(2)干燥、固定:涂片干燥后,快速通過火焰2-3次,進行固定。固定時不可過熱。

以載玻片不燙手為宜。

(3)染色:

a)初染:滴加結晶紫染色液覆蓋玻片涂布區,染色1分鐘,用水沖洗。

b)媒染:滴加革蘭氏碘液沖去殘水,并覆蓋1分鐘,水洗。

c)脫色:甩凈載玻片上水分,傾斜玻片,并襯以白紙,用95%乙醇滴洗至無紫色褪

下時為止,時間20-30S。立即用水緩緩沖洗,注意脫色時間不可過長,以免呈現

假陰性。

d)復染:滴加番紅染色液,染色3-5分鐘,水洗。

(4)鏡檢:待其自然干燥,鏡檢。

五、關鍵及注意事項

1、使用油鏡后要用二甲苯清洗高倍鏡頭;

2、涂片時,生理鹽水及取菌不宜過多,涂片應盡可能均勻;

3.水洗步驟水流不宜過大,過急,以免涂片薄膜脫落;

4、革蘭氏染色各步驟的時間控制;特別是脫色時間的控制。

六、作業

簡述染色結果,并指出革蘭氏染色的關鍵步驟,為什么要進行復染?

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